Drh. Lora Meriza   18 Februari 2021

DETEKSI RESIDU HORMON TRENBOLON ASETAT PADA DAGING SAPI

Pendahuluan

 

Produk hasil peternakan yang mengandung cemaran residu bahan kimia toksik aeperti mikotoksin, pestisida, obat hewan, dan hormon dapat mengganggu dan membahayakan kesehatan konsumen. Salah satu residu yang membahayakan manusia adalah hormon trenbolon asetat (TBA). Trenbolon asetat merupakan hormon penggertak pertumbuhan (HGP) pada ternak sapi yang berupa steroid sintetis yang bersifat androgenik. Penggunaannya pada ternak sapi dengan cara mengimplantasi TBA secara subkutan pada daun telinga ternak selama ± 60 hari sebelum ternak tersebut dipotong (Widiastuti et al., 2001). Hormon TBA tersebut dapat meningkatkan pertumbuhan bobot badan sebanyak 10% dan menurunkan konversi kebutuhan pakan dari 11% menjadi 9%. Menurut Widiastuti et al. (2001), penggunaan dan peredaran hormon tersebut masih dilarang di Indonesia. Hal lain yang mendukung pelarangan tersebut adalah tidak memadainya tingkat pendidikan dan pengetahuan serta kesadaran peternak yang menggunakan HGP untuk ditaatinya ketentuan waktu henti sebelum ternak dipotong (Akoso, 2001).

Laboratorium Kesmavet UPTD Pengujian Mutu Produk Peternakan (PMPP) Dinas Peternakan dan Kesehatan Hewan Provinsi Sumatera Barat telah melakukan deteksi hormone trenbolone pada daging sapi yang dipotong di Rumah Potong Hewan (RPH) dan penjual daging sapi di pasar tradisional. Pengujian ini rutin dilakukan setiap tahunnya terkait kegiatan pengawasan terhadap bahan pangan asal hewan. Berikut adalah salah satu contoh deteksi hormone trenbolone dimana sampel daging diambil pada tanggal 8 Agustus 2019 di Kabupaten Pasaman (6 daging di RPH, 4 daging di pasar tradisional).

 

 

Materi dan Metode

 

Bahan

Sample diambil sebanyak 2 gr setelah preparasi dari masing-masing sampel daging sapi. Sampel disimpan dalam keadaan cool box sebelum dilakukan pengujian.

Preparasi Reagen

• Methanol 10%

(10ml methanol 100% dilarutkan dengan aquades sampai 100 ml)

• Methanol 80%

(80 ml methanol 100% dilarutkan dengan aquades sampai 100 ml)

• 20 mM PBS buffer pH 7.2 – 7.5

(0.55 g NaH2PO4.H2O + 2.85 g Na2HPO4.2H2O + 9 gr NaCl dilarutkan dengan aquades sanpai 1L)

• 67 mM PBS buffer pH 7.2 – 7.5

(1.8 g NaH2PO4.H2O + 9.61 g Na2HPO4.2H2O + 9 gr NaCl dilarutkan dengan aquades sampai 1 L)

 

Ekstraksi Sampel

Lapisan lemak daging dibuang kemudian dihaluskan       Homogenkan 10 g sampel dengan 10 ml 67 mM PBS buffer dalam tabung sentrifus 50 ml, kocok selama 5 menit       2 g sampel yg sudah dihomogenkan dicampur dengan 5 ml tertbuthylmethylether dalam tabung sentrifus 15 ml, kemudian kocok selama 30-60 menit.       Sentrifus selama 10 menit       supernatant dipindahkan ke dalam tabung sentrifus baru        Ulangi lagi prosedur ekstraksi dengan 5 ml tertbuthylmethylether kemudian dikocok kencang selama 30-60 menit        kemudian disentrifus        gabungkan hasil supernatant kemudian evaporasi lapisan ether dengan N-evaporator sampai kering kemudian dilarutkan dengan 1 ml methanol 80 %       encerkan larutan methanol dengan 2 ml PBS buffer 20 mM        hasil ekstraksi dapat disimpan pada suhu 2-8°C selama 2 hari dan berminggu-minggu pada -20°C

Purufikasi Sampel dengan C18

Bilas kolom dengan 3 ml methanol 100%, laju alir : 1 tetes per detik      bilas kembali dengan 2 ml PBS buffer 20 mM (jangan sampai kolom kering)      lewatkan seluruh sampel sebanyak 3 ml ke dalam kolom      bilas kolom dengan 2 ml methanol 10%       pastikan semua cairan di dalam kolom terbuang dengan menggunakan syringe atau dengan N2      Elusikan perlahan dengan 1 ml methanol 80%, laju alir : 1 tetes per 4 detik atau 15 tetes per menit       encerkan hasil elusi dengan 1 ml aquades      hasil purifikasi dapat disimpan pada suhu 2-8°C selama 2 minggu dan selama berbulan-bulan -20°C.

Preparasi Europroxima Reagen

1. Rinsing Buffer (20X)

Encerkan rinsing buffer sebelum digunakan, kondisi fresh Ex : 2 ml rinsing buffer+ 38 ml aquades

1. Conjugate solution (lyophilized)

Masukkan 4 ml dilution buffer ke dalam vial conjugate solution, kemudian di mix

1. Antibody solution (lyophilized)

Masukkan 4 ml dilution buffer ke dalam vial antibody solution, kemudian di mix

Setelah digunakan semua reagen disimpan pada suhu 2-8°C

 

 

a                                           b

Gambar 1. Europroxima trenbolone (a), Rida C18 Column (b)

 

Prosedur pengujian

Seluruh Reagen disiapkan       siapkan well      pipet 100µl zero standar (blank), 50µl zero standar (Bmax) dan 50 µl standar 1-6 *duplo       pipet 50 µl sampel ke dalam well *duplo      pipet 25 µl conjugate solution ke dalam masing-masing kecuali Blank      pipet 25 µl antybodi solution ke dalam masing-masing well *kecuali blank      shake plate selama 10 detik        inkubasi selama 1 jampada suhu ruang     Buang larutan dalam micropipet plate, kemudian pipet 300 µl rinsing buffer ke dalam masing masing well.ulangi pencucian 2x      pipet 100 µl substrate solution ke dalam masing-masing well      inkubasi selama 30 menit     pipet 100µl stop solution ke dalam masing-masing well     segera baca nilai absorbansi dengan ELISA areader, 450 nm      Analisa dengan simplefit dan masukkan angka 2 sebagai multiply factor

 

 

Hasil dan Pembahasan

 

Hasil pemeriksaan hormon Trenbolon dapat dilihat pada Tabel 1.

 

No	Kode Sampel	Jenis Sampel	Hormon
			Nilai	BMR
1	DSS 30	Daging sapi segar	1.072	<2
2	DSS 31	Daging sapi segar	1.018	<2
3	DSS 32	Daging sapi segar	0.864	<2
4	DSS 33	Daging sapi segar	1.002	<2
5	DSS 34	Daging sapi segar	1.116	<2
6	DSS 35	Daging sapi segar	1.116	<2
7	DSS 36	Daging sapi segar	1.088	<2
8	DSS 37	Daging sapi segar	1.033	<2
9	DSS 38	Daging sapi segar	0.880	<2
10	DSS 39	Daging sapi segar	1.002	<2

Tabel 1. Hasil Pemeriksaan Hormon Trenbolon Pada daging Sapi

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Dari hasil Uji trenbolon didapatkan semua nilai BMR sampel daging segar  < 2  ppb . Hal ini berarti  penggunaan TBA sudah memperhatikan withdrawal time yaitu 60-70 hari setelah implantasi. Menurut Standar Codex untuk obat hewan atau hormon umumnya mengacu pada persyaratan acceptable daily intake (ADI) dan atau maximum residue limit (MRL). Standar Codex menetapkan bahwa ADI trenbolon asetat adalah 0-0,02 µg/kg berat badan dan MRL trenbolon pada daging sapi dan hati sapi masing-masing 2 µg/kg (2 ppb) dan 10 µg/kg (10 ppb) (CAC, 2012). Batas maksimum residu TBA pada daging, hati maupun pada urin di Indonesia sampai saat ini belum ditetapkan dalam SNI (Standar Nasional Indonesia). Efek samping dari residu TBA dalam konsentrasi tinggi (diatas 2 ppb) sangat merugikan bagi kesehatan masyarakat antara lain peningkatan sel kanker, penurunan fertilitas, reaksi hipersensitif, gangguan kardiovaskuler, ganguan fungsi hati, penurunan produksi testosteron, spermatogenesis, oligospermia, serta atrofi testis (Bahrke & Yesalis, 2004; Maravelias et al., 2005). Monitoring rutin terhadap adanya residu TBA sebagai salah satu kontrol dalam keamanan pangan sangat diperlukan.

 

 

Daftar Pustaka

 

Akoso BT. 2001. Kebijakan teknis dalam penggunaan obat hewan sebagai pemacu pertumbuhan hewan pangan. Seminar Nasional ASOHI Penggunaan Pemacu Pertumbuhan pada Ternak secara Aman dan Efektif.

Bahrke MS, Yesalis CE. 2004. Abuse of anabolic androgenic steroids and related substances in sports and exercise. Current Opinion in Pharmacology 4: 614-620.

Maravelias C, Dona, A, Stefanidou M, Spiliopoulou. 2005. Adverse effect of anabolic steroids in athlete a constant threat. Toxicology Letter 158: 167-175.

Widiastuti R, Murdiati TB,Yuningsih. 2000. Residu hormon 17β trenbolon pada daging dan hati sapi impor yang beredar di DKI Jakarta. Seminar Nasional Peternakan dan Veteriner. Balai Penelitian Veteriner. p578-581.